عزل وتنقية إنزيم داي أمين أوكسيديز من البازلاء الخضراء ودراسة خواصه

القسم: Article
إصدار
مجلد 21 عدد 3 (2025): المجلد 21 العدد 3
منشور
Sep 1, 2025
##editor.issues.pages##
600-618

الملخص

     تضمن البحث عزل إنزيم داي أمين أوكسيديز من  مستخلص البازلاء الخضراء وتنقيته جزئياً، وكذلك تعيين وزنه الجزيئي التقريبي، إذ تم عزل إنزيم داي أمين أوكسيديز باستخدام تقانات  حيوية مختلفة، إذ تم فصل المركبات البروتينية لمحلول راسب كبريتات الأمونيوم بنسبة تشبع 65% وباستخدام تقنية كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي على عمود الفصل الحاوي على الهلام سيفاديكس G-100 . وقد حصلنا على حزمتين واضحتين، إذ تم استبعاد الحزمة A ، لأن فعالية إنزيم داي أمين أوكسيديز فيها قليلة جدا مقارنة بالحزمة B  التي تم الاعتماد عليها، إذ بلغ التركيز النوعي لإنزيم داي أمين أوكسيديز في هذه الحزمة (61.32  ng/ml ) وإن عدد مرات التنقية هي(3.58 مرة) ونسبة الاستعادة هي(14.25%) لمستخلص البازلاء . كذلك تم استخدام تقنية الترشيح الهلامي باستخدام الهلام من نوع G100 لتقدير الوزن الجزيئي التقريبي للإنزيم حيث بلغت 112201 دالتون  تقريبا, فضلا عن ذلك فقد تمت دراسة تأثير المثبطات والمنشطات على فعالية الانزيم المعزول لذلك عند استخدام دواء Zolmitriptan و دواء الصداع الشائع الاستعمال-البانادول- فقد وجد إن الاول يمتلك القابلية الاكبر على زيادة فعالية إنزيم داي أمين أوكسيديز في حين ان العناصر مثل الرصاص والبوتاسيوم وضحت إن الرصاص يمتلك القابلية الاكبر في خفض فعالية إنزيم داي أمين أوكسيديز مقارنة مع البوتاسيوم الذي يعد مثبطا أقل حدة لفعالية إنزيم داي أمين أوكسيديز المعزول والمنقى من البازلاء الخضراء.

المراجع

  1. Schwelberger, H.G.; Feurle, J.; & Ahrens, F. (2013). Characterization of diamine oxidase from human seminal plasma. J. Neural Transm.120, 983–986.
  2. Ji, Y.; Sakata, Y.; Li, X.; Zhang, C.; Yang, Q.; Xu, M.; Wollin, A.; Langhans, W.; & Tso, P. (2013). Lymphatic diamine oxidase secretion stimulated by fat absorption is linked with histamine release. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 304, G732–G740.
  3. Pinzer, T.C.; Tietz, E.; Waldmann, E.; Schink, M.; Neurath, M.F.;& Zopf, Y. (2017). Circadian profiling reveals higher histamine plasma levels and lower diamine oxidase serum activities in 24% of patients with suspected histamine intolerance compared to food allergy and controls. Allergy, 73, 949–957.
  4. Izquierdo-Casas, J., Comas-Basté, O., Latorre-Moratalla, M.L., Lorente-Gascón, M., Duelo, A., Soler-Singla, L., & Vidal-Carou, M.C. (2019). Diamine oxidase (DAO) supplement reduces headache in episodic migraine patients with DAO deficiency: A randomized double-blind trial. Clin. Nutr.38(1):152–158. doi: 10.1016/j.clnu.2018.01.013.
  5. Tobajas, Y., Alemany-Fornés, M., Samarra, I., Romero-Giménez, J., Tintoré, M., Del Pino, A., Canela, N., Del Bas, J. M., Ortega-Olivé, N., de Lecea, C., & Escoté, X. (2023). Diamine Oxidase Interactions with Anti-Inflammatory and Anti-Migraine Medicines in the Treatment of Migraine. Journal of clinical medicine, 12(23), 7502. https://doi.org/10.3390/jcm12237502.
  6. Joan Izquierdo-Casas, Oriol Comas-Basté, M. Luz Latorre-Moratalla, Marian Lorente-Gascón, Adriana Duelo, M. Carmen Vidal-Carou, & Luis Soler-Singla. (2018). Low serum diamine oxidase (DAO) activity levels in patients with migraine. Journal of Physiology and Biochemistry .74(1) 93-99.
  7. Wu, D. T., Li, W. X., Wan, J. J., Hu, Y. C., Gan, R. Y., & Zou, L. (2023). A Comprehensive Review of Pea (Pisum sativum L.): Chemical Composition, Processing, Health Benefits, and Food Applications. Foods (Basel, Switzerland), 12(13), 2527. https://doi.org/10.3390/foods12132527
  8. Boulfekhar, R.; Ohlund, L.; Kumaresan, K.M.; Megoura, M.; Warkentin, T.D.; Ispas-Szabo, P.; Sleno, L.; &Mateescu, M.A. (2023). Diamine Oxidase as a Therapeutic Enzyme: Study of Germination from Vegetal Sources and Investigation of the Presence of β-N-Oxalyl-L-α, β-diaminopropionic Acid (β-ODAP) Using LC-MS/MS. Int. J. Mol. Sci. 24, 4625.https://doi.org/10.3390/ijms24054625
  9. Ruscigno, M. R.D. (2016). Issue pea protein.Today's Dietitian . Vol. 18, No. 12, P. 32.
  10. Robyt, F. J., & White, J. B. (1987). Biochemical techniques theory and practice. Books / Cole Publishing Com., USA.pp:125-135,141,235-236,246,263,269.
  11. Schacterle, G. R., & Pollack, R. L. (1973). A simplified method for the quantitative assay of small amount of protein in biological material. Anal. Biochem. 51, 654-655.
  12. Miltko, R., Bełżecki, G., Kasperowicz, A., & Michałowski, T. (2010). Isolation and purification of chitinolytic enzymes of rumen ciliates Eudiplodinium maggii. Progress on Chemistry and Application of Chitin and its Derivatives, 15, 189-196.
  13. Burtis C.A, Ashwood,E,R. Bruns,D.e. (2012), Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, By Saunders ,an Imprint of Elsevier Inc,USA, pp,356,368.
  14. Voet, D., Voet, J. G., & Pratt, C. W. (2016). Fundamentals of biochemistry: life at the molecular level. John Wiley & Sons.
  15. Hinton, P.P. (2004). Statistics Explained. 2d Edition by Routledge printed in the USA and Canada pp.85-125.
  16. H. F. et al. (2010). "The Role of Diamine Oxidase in Histamine Metabolism and its Clinical Significance." European Journal of Pharmacology, 641(2-3), 114-122.
  17. Schwelberger, H. G., & Bodner, E. (1997). Purification and characterization of diamine oxidase from porcine kidney and intestine. Biochimica et biophysica acta, 1340(1), 152–164. https://doi.org/10.1016/s0167-4838(97)00039-3
  18. Yang, R., Chen, H., Han, Y., & Gu, Z. (2012). Purification of diamine oxidase and its properties in germinated fava bean (Vicia faba L.). Journal of the science of food and agriculture, 92(8), 1709–1715. https://doi.org/10.1002/jsfa.5536
  19. Suzuki, Y. & Hagiwara, M. (1993). Purification and characterization of diamine oxidase from Zea mays shoots. Phytochemistry 33:995–998.
  20. Elmore, B.O., Bollinger, J.M., et al. (2002a). Ionic strength and its effect on enzyme activity: A study of ion-enzyme interaction in diamine oxidase. Journal of Biological Chemistry.277(47):45420-45425. doi:10.1074/jbc.M206625200.
  21. Giebisch, G., & Wang, W. (1996). Potassium transport: From clearance to channels and pumps. Kidney International. 49(6):1624-1631. doi:10.1038/ki.1996.229.
  22. Flora, S.J.S., Gupta, D., &Tiwari, A. (2012). Toxicity of lead: A review with recent updates. Interdisciplinary Toxicology. 5(2):47-58. doi:10.2478/v10102-012-0009-2.
  23. Patra, R.C., Rautray, A.K., & Swarup, D. (2011). Oxidative stress in lead and cadmium toxicity and its amelioration. Veterinary Medicine International. 457327. doi:10.4061/2011/457327.
  24. Elmore, B.O., Bollinger, J.A., & Dooley, D.M. (2002b). The effects of heavy metals on enzymatic activity. Journal of Biological Inorganic Chemistry, 7(6), 565-579. https://doi.org/10.1007/s00775-002-0342-x​:contentReference[oaicite:0] {index=0}
  25. Siddiqui, M.K.J., Ahamed, M., et al. (2013). Low-level lead exposure: A review of its effects on health and the environment. Environmental Toxicology and Pharmacology. 36(2):198-204. doi: 10.1016/j.etap.2013.02.005.
  26. Berg, J.M., Tymoczko, J.L., & Stryer, L. (2012). Biochemistry. 7th ed. W.H. Freeman.
  27. Wang, Y., Zhang, T., et al. (2017). Interplay of metabolic pathways in the regulation of enzyme activity. Molecular Systems Biology. 13(4): 853. doi:10.15252/msb.20167443.
  28. Wang, J., Zhang, R., et al. (2015). Role of metal ions in enzyme activity: A review. Journal of Inorganic Biochemistry. 152:51-56. doi: 10.1016/j.jib.2015.07.006.
  29. Halliwell, B., & Gutteridge, J.M.C. )2015). Free Radicals in Biology and Medicine. 5th ed. Oxford University Press; T.
  30. Riley, R.J., & Workman, P. (1992). Inhibition of aldehyde dehydrogenase by paracetamol (acetaminophen) and its role in inhibiting oxidative stress Biochemical Pharmacology, 44(12), 2507-2512.
  31. Schwelberger, H.G. (2009). Histamine N-methyltransferase (HNMT) and diamine oxidase (DAO): Key enzymes in histamine metabolism. Inflammation Research. 58(1):3-8. doi:10.1007/s00011-008-0073-2. 27. Wang, Y., Zhang, T., et al. (2017). Interplay of metabolic pathways in the regulation of enzyme activity. Molecular Systems Biology. 13(4): 853. doi:10.15252/msb.20167443.

المؤلفون

ندى ادريس عبدالرزاق

قسم الكيمياء/ كلية العلوم/ جامعة الموصل

سكينة حسين رشيد

قسم الكيمياء/ كلية العلوم/ جامعة الموصل

المعرفات

https://doi.org/10.33899/berj.2025.Vol21.Iss3.53549
تنزيل هذا الملف
PDF

الإحصائيات

كيفية الاقتباس

ندى ادريس عبدالرزاق, & سكينة حسين رشيد. (2025). عزل وتنقية إنزيم داي أمين أوكسيديز من البازلاء الخضراء ودراسة خواصه. مجلة ابحاث كلية التربية الاساسية, 21(3), 600–618. https://doi.org/10.33899/berj.2025.Vol21.Iss3.53549